|
|
Determination of low-molecular-mass heparin using affinity capillary electrophoresis
Molnárová, Katarína ; Křížek, Tomáš (advisor) ; Sobotníková, Jana (referee)
Unfractionated heparin, which is a widely used anticoagulant, is frequently replaced with low-molecular-mass species. They are used due to their more predictable anticoagulant effect with less bleeding complications and also they have prolonged anticoagulant effect. For monitoring of low-molecular-mass heparin levels, anti-factor Xa assay is used, which has some significant drawbacks. This work is dedicated to determination of low-molecular-mass heparin, namely Fraxiparine, using affinity capillary electrophoresis. Heparin is a polysaccharide which does not exhibit a significant UV absorption; therefore, its indirect detection method was used. Fraxiparine forms a stable complex with protamine. Protamine is an arginine-rich, positively charged peptide which is used to suppress heparin anticoagulant effect. Because protamine has a complex, not precisely defined structure, it was replaced by well-defined tetraarginine. The method uses phosphoric acid of 9 mmol L-1 concentration with addition of 0.1% (w/v) hydroxyethylcellulose as the background electrolyte. The samples are injected hydrodynamically into the capillary by a pressure of 5 kPa. First, the zone of Fraxiparine was injected, followed by the zone of tetraarginine (5 s). After that, 30 kV voltage was applied for 30 s. During this time the...
|
|
|
Characterization of protamine influence on indirect electrophoretic determination of heparin
Petrák, Ondřej ; Křížek, Tomáš (advisor) ; Kubíčková, Anna (referee)
Cílem této bakalářské práce bylo studium interakcí heparinu a protaminu v prostředí kapilární zónové elektroforézy pomocí jejich vlivu na velikost plochy píku tetraargininu. Byla použita křemenná kapilára o vnitřním průměru 50 µm a celkové délce 50 cm. Efektivní délka kapiláry byla 41,5 cm a vzorek byl dávkován na dlouhý konec kapiláry. Byl optimalizován způsob dávkování jednotlivých zón, vhodné složení základního elektrolytu bylo již známo z předešlých experimentů, na které tato práce navazovala. Základní elektrolyt byl složen z 0,1 M roztoku kyseliny trihydrogenfosforečné a 0,1% roztoku hydroxyethylcelulózy. Vzorek byl dávkován hydrodynamicky tlakem 5,0 kPa po dobu 120 s. Následně byla stejným tlakem po dobu 90 s dávkována zóna základního elektrolytu. Poslední dávkovanou zónou byla zóna tetraargininu o koncentraci 1 mg/ml, která byla dávkována hydrodynamicky tlakem 5,0 kPa po dobu 3 s. Posledním krokem bylo vložení separačního napětí 30 kV po dobu 30 s. Tetraarginin byl detegován při λ = 200 nm. Byly změřeny vlivy samotného heparinu/ protaminu a jejich směsí v různých vzájemných poměrech. Bylo ověřeno, že se zvyšující se koncentrací heparinu dochází k poklesu plochy píku tetraargininu. Nově bylo zjištěno, jaký vliv na velikost tohoto účinku má přítomnost protaminu. Zde došlo k překvapivému...
|
guest ::
